Introdução

Para apoiar eficazmente os comités de farmacopeia, todos os membros do laboratório passam por uma extensa formação para trabalhar com metodologias normalizadas. Fornecer métodos de HPTLC adaptados aos requisitos específicos das farmacopeias envolve mais do que apenas HPTLC padronizado; cada cientista deve também compreender e seguir um processo geral de desenvolvimento de métodos. Este processo abrange várias etapas principais, ilustradas neste artigo utilizando a monografia da Farmacopeia Europeia (Ph. Eur.) sobre a folha do Epimedium como exemplo.

 

Como técnica cromatográfica preferencial para a identificação de medicamentos à base de plantas, o HPTLC visa determinar um cromatograma característico (impressão digital) com base na posição relativa, cor e intensidade de zonas específicas. De acordo com a Ph. Eur., o HPTLC deve aderir ao capítulo geral 2.8.25. Este documento descreve detalhadamente os pontos específicos relevantes para o desenvolvimento de um método de identificação HPTLC.

Discussão

O desenvolvimento de um método de identificação adequado envolve várias etapas:

 

Etapa 1: definição

 

O âmbito do método deve especificar claramente o artigo (por exemplo, a planta medicinal) a identificar. Para além do nome latino da planta, a definição deve incluir a(s) parte(s) da planta aceite(s) e o processo pelo qual o artigo é obtido (secagem, corte, extração, etc.). Idealmente, um método de identificação seja específico para o artigo da monografia e distinga artigos relacionados que possam ser considerados adulterantes.

 

Várias monografias sobre “Epimedium” têm como alvo folhas ou ervas secas inteiras ou fragmentadas de diversas espécies (ver tabela) de acordo com a disponibilidade em diferentes mercados. A monografia da Ph. Eur. sobre folhas de Epimedium inclui folhas secas inteiras ou fragmentadas das espécies principais E. koreanum Nakai, E. brevicornum Maxim., e E. pubescens Maxim., incluindo misturas das mesmas.

 

Os critérios de aceitação do medicamento à base de plantas “Folha de Epimedium” devem incluir os medicamentos selecionados e excluir todos os outros (por exemplo, E. sagittatum).

Etapa 2: recolha de amostras

 

Amostras de diferentes origens e espécies relacionadas são recolhidas pelo grupo de farmacopeia e distribuídas pelos vários laboratórios colaboradores. Cada laboratório também recolhe as suas próprias amostras. Uma vasta gama de amostras é crucial para garantir que o método é aplicável à análise de rotina de amostras de mercado.

 

Etapa 3: desenvolvimento/avaliação de método(s) HPTLC

 

Utilizando condições padrão de HPTLC, os métodos das farmacopeias são avaliados quanto à reprodutibilidade, praticidade e adequação ao fim. Outros métodos também podem ser considerados. Para a folha de Epimedium foram propostos vários métodos, cada um com vantagens e limitações específicas.

 

Uma primeira proposta foi feita ao Grupo de Trabalho de Medicina Tradicional Chinesa (MTC) pelo Instituto de Matéria Médica de Xangai (SIMM), utilizando água, ácido fórmico, n-butanol, acetato de etilo 1:1:3:6 (V/ V/ V/V) como solvente revelador. Durante a revisão por pares no nosso laboratório, os valores de RF foram mais baixos e as cores das zonas ligeiramente diferentes.

 

Isto levou-nos a optimizar a preparação das amostras, o desenvolvimento de solventes e a detecção, com base num método previamente estabelecido para a separação de flavonóides, utilizando acetato de etilo - ácido fórmico - água 8:1:1 (V/V) e derivatização com reagentes NP/PEG .

Etapa 4: seleção do método e definição dos critérios de aceitação

 

Em várias iterações, os especialistas comparam as propostas apresentadas e chegam a acordo sobre a mais adequada. Com este método, são analisadas múltiplas amostras e os resultados são descritos em formato de tabela. Os dados estão incluídos na monografia e publicados para comentários públicos. No caso da folha de Epimedium, as espécies podem ser claramente discriminadas. A tabela de resultados descreve apenas as características comuns às espécies abrangidas pela monografia.